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Consejos de Cultivo de Tejidos

Uncategorized agosto 26, 2012

El cultivo de tejidos es la propagación de células en un medio líquido de crecimiento en el laboratorio para diversos fines científicos. Por ejemplo, los cultivos de tejidos se utilizan en el diagnóstico de enfermedades genéticas, como un medio para el cultivo de los patógenos intracelulares, tales como bacterias o virus, o en la investigación de las propias células.
Las células de cultivo de tejidos
Algunas células se adhieren a la parte inferior de placas petri o permanecen suspendidas en el líquido. Las células pueden ser de origen vegetal o animal. Las células utilizadas en los cultivos de tejidos pueden ser células primarias, lo que significa que se recogieron directamente de un organismo, o de una línea celular que ha sido mantenido en cultivo. Las líneas celulares son a menudo las células cancerosas, y esto debe tenerse en cuenta al planificar o interpretar los experimentos.
Tratamiento de las células con cuidado
Las células adherentes se retiran de su placa de Petri para el paso por raspado o con una proteasa, en general, la tripsina y EDTA. Raspado mata muchas células y sólo debe utilizarse en la preparación de lisados celulares (preparados líquidos de contenido de la celda para el análisis) o cuando tripsina / EDTA absolutamente debe ser evitada.
Tripsinizando elimina no sólo las proteínas de las células que se adhieren a la placa, pero la mayoría de las otras proteínas en la membrana de la célula, también. Las células pelota y tomar un poco de tiempo, generalmente durante la noche, para restablecer un vínculo con el plato. Adición de una cantidad mínima de tripsina – alrededor de 1 ml para un matraz de 25cm2 – oscilando el matraz durante cinco segundos o menos para recubrir la monocapa y luego vertiendo o aspirar el exceso de tripsina se reducirá la cantidad de tripsina al que se expone la monocapa. Dejar reposar las células en la incubadora durante tripsinización.
Después de que las células deslizarse fuera de la parte inferior del plato, añadir medios con suero y aspirar el lisado arriba y hacia abajo suavemente la pipeta. Permitir un medio poco para permanecer en el plato como pipetear hacia arriba y abajo varias veces para separar las matas y obtener una suspensión homogénea.
No aspirar burbujas en la pipeta. Además, no mezclar vigorosamente o vórtice de la suspensión de células, las células son muy frágiles en este estado balled-up.

Para calentar Desactivar o No inactive por calor
Cuando las técnicas de cultivo de células estaban en su infancia, suero fetal bovino (FBS) se sabe que contienen proteínas del complemento, que son proteínas del sistema inmunitario que lisan las células. Las proteínas del complemento no son deseables en el cultivo celular. El calor de inactivación de FBS a 56 grados Celsius durante 30 minutos hará que las proteínas del complemento inactivo. Precalentamiento del FBS a 37 º C también es suficiente para inactivar las proteínas del complemento.
En los primeros días, FBS calor inactivación de los contaminantes también mató a micoplasmas y otros. En el momento, la esterilización de filtro se realiza con filtros 0.45um. Hoy en día, filtro de SFB y esterilizar medios de comunicación a través de filtros o incluso 0.1um 0.04um. No micoplasma se deslizará a través de eso.
Esto nos deja la cuestión de si debe o no inactive por calor.
La inactivación por calor se degrada todos los componentes de la FBS – tales como vitaminas, aminoácidos y factores de crecimiento – posiblemente por debajo del umbral para algunas líneas celulares melindrosos.
Si está trabajando con una línea de células de crecimiento lento o melindroso, considere simplemente filtrar esterilizar el FBS. Usted puede encontrar esto aumenta la robustez de sus células.

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