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Cómo sincronizar las células en cultivo

Uncategorized agosto 26, 2012

Para comprender las bases moleculares y bioquímicos del crecimiento celular y la división, es necesario estudiar los mecanismos reguladores del ciclo celular. Estudios del ciclo celular se refieren esencialmente a la coordinación o sincronización de las células en una fase específica. Sincronización de la célula es un método de poner las células en diferentes etapas para una etapa particular de la división celular. Hay muchos métodos establecidos por los científicos en el laboratorio para sincronizar las células en fases específicas del ciclo celular. Los métodos más comunes son la privación de suero de las células durante un período de tiempo o el uso de agentes farmacológicos tales como Nocodazol. Cualquiera de estos métodos hace que las células que parar en una fase específica del ciclo celular.
Instrucciones
1. Privación de suero
Placa sus células en medio de cultivo celular normal suplementado con 10 por ciento de suero fetal bovino durante 12 a 14 horas y dejar que las células se unen a las placas de cultivo de tejidos.
Una vez que las células se han unido, retire el papel y lavar las células con 10 ml de solución tampón fosfato.
Añadir nuevos medios de crecimiento suplementado con 0,2 por ciento de suero fetal bovino para 16-48 horas. El período de tiempo depende del tipo de células que está utilizando. Algunas células requieren menos tiempo, mientras que otros requieren más tiempo. Esta etapa es el período de privación de suero.
Después de que el período de tiempo establecido es superior, lavar las células de nuevo con 10 ml de solución tamponada con fosfato.
Sustituir el medio de crecimiento antiguos suplementado con suero fetal bovino 10 por ciento. Las células están sincronizados y listos para su experimento.
Nocodazol tratamiento
Placa de las células en un medio de cultivo celular normal complementado con un 10 por ciento de suero fetal bovino durante 12-14 horas y dejar que las células se adhieren a las placas de cultivo tisular.
Retirar los medios y lavar las células con 10 ml de solución tamponada con fosfato.
Añadir medios regulares de crecimiento, suplementado con 10 por ciento de suero fetal bovino y 100ng/ml de nocodazol a las células durante 12 horas en 37 grados Celsius incubadora.
Observar las células bajo el microscopio después de 12 horas de tratamiento. Las células deben ser redondeo y conseguir desprendido de la placa de cultivo.
Recoger las células por tocar la placa de cultivo y el medio pipeteando arriba y abajo varias veces. Transferir las células a medio que contiene un tubo de polipropileno de 50-mililitro.
Centrifugar las células a 100 x g durante 10 minutos. Eliminar el sobrenadante. Se lavan las células en 10 ml de solución tamponada con fosfato y se centrifuga de nuevo a 100 xg durante 10 minutos.
Suspender las células en medio de crecimiento normal suplementado con suero fetal bovino 10 por ciento. Las células están listas para su experimento.
Consejos y advertencias
• El medio de crecimiento varía de un tipo de célula.
• Estandarizar el tiempo de privación de suero.

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